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解析糖基化修飾及位點分析

經常聽到糖基化修飾,今天帶大家一探究竟。什么是糖基化修飾呢?糖基化是在糖基轉移酶的控制下,蛋白質或脂質附加上糖類的過程,發生于內質網和高爾基體。糖基化修飾是一類非常重要的翻譯后修飾,大部分膜蛋白和分泌蛋白均為糖蛋白,糖基化修飾不僅影響蛋白質的空間構象、活性、運輸和定位,同時在信號轉導、分子識別,免疫等過程中發揮重要作用。

通常將糖基化分為兩類:N連接的糖基化 (糖通過一個N原子連接在Asn)和O連接的糖基化 (糖通過O原子連接在Ser/Thr)。先看N-糖的生物合成,在糖苷酶的作用下,N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和甘露糖(Mannose)分子被連接在Asn殘基上,形成N-糖的基本架構。半乳糖(Gal)、N-乙酰神經氨酸(Neu5AC)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc) 等分子會參與糖鏈形成的完整過程。

再來看一下O連接的糖基化,O-糖在個體發育、腫瘤發生、細胞粘附等諸多生命活動中均發揮重要作用,但是由于缺乏共有修飾序列信息和有效的分析手段,因此對O連接的糖基化修飾知之甚少。O連接的糖基化是由不同的糖基轉移酶催化的, 每次加上一個單糖,最后在糖鏈末端加上唾液酸殘基(圖中紫色方塊)。

如何得知到底哪個位點發生了O-連接的糖基化呢?是否有一種酶能夠切割糖基化位點所在的氨基酸,使得蛋白會被切成幾段,這樣以來通過質譜分析或者其他方法就能分析出糖基化發生的位點呢?答案Yes. 這款酶就是瑞典Genovis公司的OpeRATOR,該酶在唾液酸去除酶SialEXO的幫助下,可以切割O-糖基化位點所在氨基酸的N端,真正做到了哪里有糖切哪里!酶切示意圖如下:

兩種酶的特征如下圖所示:

這樣的O-糖位點切割酶是否對您的實驗有幫助呢?我們還提供配套的試劑盒,試劑盒中提供O-糖蛋白親和柱,OpeRATOR和SialEXO,可柱上酶切并特異性回收O-糖肽段。

注:圖片等部分信息來源網絡

中源生物是Genovis授權的中國區代理

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