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解析ProteinA與G

提到Protein A和Protein G,相信大家并不陌生,由于它們和抗體的特異性親和作用,所以可用于純化抗體,免疫共沉淀實驗等,其應用非常廣泛,本期小編帶大家仔細的認識一下Protein A和G,兩者的區別以及如何從中選擇。

1. Protein  A

20世紀中期,Jensen發現有一種蛋白可以與人和兔血清抗體廣泛結合,該蛋白于1964年首次被稱為Protein A。  Protein A是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質,分子量42KD,它能夠特異性地結合多種免疫球蛋白的Fc區段而與Fab區或輕鏈結合很弱。天然的Protein A有5個IgG結合結構域和未知功能的非Fc結合域,結構示意圖如下:

此結構的蛋白A大量結合IgG的同時,其非Fc結合域能結合部分雜蛋白,導致洗脫下來的IgG純度不夠,因此科學家利用基因工程的方法克隆Protein A的基因并進行改造,得到重組型蛋白A,其非特異性結合明顯降低。重組的蛋白A經過改造后有一個C端的半胱氨酸,可以單點偶聯到瓊脂糖上,降低空間位阻的同時提高IgG的結合能力。一步親和層析后樣品純度可超過90%。

2. Protein G

蛋白G來自于鏈球菌G族的細胞表面蛋白,是III型Fc受體,分子量為25KD,其通過類似于蛋白A的非免疫機制而結合抗體的Fc段,蛋白G與蛋白A均可結合抗體的Fc段,不同的是,蛋白G還能結合Fab段,且蛋白G可以更廣泛的結合更多類型的IgG分子,多克隆IgG分子,同時蛋白G與血清蛋白結合水平低,產物純度高,且配基脫落更低。抗體基本結構和蛋白A/G的結合位點如下圖所示:

蛋白G可以純化不能與蛋白A結合的哺乳動物抗體。重組型的蛋白G經改造后已經去除了白蛋白結合位點(血清白蛋白是抗體來源的主要污染物)及細胞表面結合位點,減少了非特異性結合。

3. Protein A 和G親和力對比

蛋白A和蛋白G對于不同種屬和不同亞型的抗體結合能力差異如下表所示,蛋白A對兔來源抗體的親和力較高,蛋白G對于小鼠等部分哺乳動物抗體的親和力較高。

 

現在對于蛋白A和蛋白G,您是否有了更深入的認識呢?其實我們還有多種抗體親和材料供選,適合于捕捉各種抗體片段的CaptoL,以及有更好耐堿性的MabSelect SuRe,以及高載量高性能的MabSelect PrismA。

 

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